Entretien avec Gwenaël Rabut, chef d’équipe à l’Institut de Génétique et Développement de Rennes

Pour en savoir plus sur l'institut https://igdr.univ-rennes1.fr/rabut

 

Quelle(s) technologie(s) Promega avez-vous utilisée(s) ?

Notre équipe s’intéresse à l’ubiquitylation des protéines et nous travaillons sur le modèle levure S. cerevisiae. Nous connaissons les technologies dérivées de la NanoLuc depuis longtemps et dans le cadre de ce projet nous avons utilisé l’approche NanoBiT.

Pourriez-vous nous résumer en quelques phrases le projet de recherche pour lequel vous avez utilisé cette technologie ?

La détection des protéines ubiquitylées est souvent difficile en raison de leur faible abondance. Nous avons donc développé un test sensible de complémentation de fragments en utilisant l’approche NanoBiT. La sous-unité SmBiT de la NanoLuc® Luciférase a été couplé à la protéine ubiquitine et nous avons créé une banque de protéines de levures taggées avec l’autre sous unité de cette enzyme appelée LgBiT. Nous co-exprimons la SmBiT-Ubiquitine et une protéine taggée LgBiT dans les cellules : si la protéine est ubiquitinylée, les 2 sous-unités LgBiT et SmBiT sont suffisamment proches pour interagir et reconstituer une NanoLuc® Luciférase active et il y a donc émission d’un signal lumineux en présence du substrat de la NanoLuc® Luciférase.

La mise au point de ce test a fait l’objet d’une publication récente dont voici la référence :

Le Boulch M, Brossard A, Le Dez G, Léon S, Rabut G. Sensitive detection of protein ubiquitylation using a protein fragment complementation assay. J Cell Sci. 2020 Jun 24;133(12):jcs240093. doi: 10.1242/jcs.240093. Erratum in: J Cell Sci. 2020 Aug 12;133(15): PMID: 32409563.

Pourquoi avez-vous choisi cette approche ?

Pour sa sensibilité, car comme les protéines ubiquitylées sont peu abondantes, il nous fallait une technologie ultra-sensible, ce qui est le cas de la luminescence en général, et de la NanoLuc ®Luciférase en particulier.

Avez-vous des idées ou des projets que vous souhaiteriez mettre en place avec les technologies en luminescence développé par Promega ? quels seraient vos besoins, vos « envies » pour aller plus loin?

En plus de l’approche NanoBiT nous utilisons déjà aussi la NanoLuc entière comme gène rapporteur et l’approche HiBiT pour détecter les protéines que nous taggons avec la LgBiT. Nous continuerons à utiliser NanoBiT pour nos études d’interaction protéine-protéine car cette technologie nous donne entière satisfaction.