6 Bonnes raisons ( et plus !) pour lesquelles quantifier son ADN est important
Connaitre avec précision la quantité d’ADN dont vous disposez est fondamental pour réussir vos expérimentations.
1-Gagner du temps en évitant d’avoir à refaire vos expérimentations
Sans quantifier votre ADN comment pouvez-vous être certain de mener votre étude avec toujours la même quantité de matrice ? Utiliser toujours le même volume ne garantit pas d’introduire la même quantité d’ADN dans le tube. La probabilité d’obtenir le même rendement à chaque nouvelle extraction est relativement faible. En conséquence sans connaitre la concentration en ADN de votre échantillon, la quantité introduite à chaque essai n’est pas garantie et vous pouvez être contraint de refaire vos manips.
2-Être reproductible en utilisant toujours la même quantité d’ADN dans vos applications
De nombreuses variables doivent être prises en compte en recherche. Utilisez des réactifs fiables, de qualité vous aideront dans la validation de vos résultats. Par ailleurs vous devez vous assurez que la concentration de votre ADN ne soit pas une variable. Pour déterminer de manière spécifique et précise votre concentration en ADN, il est préférable de le quantifier avec des marqueurs fluorescents se liant à l’ADN, la mesure par absorbance à 260nm ne donnant qu’une estimation peu précise.
3-Savoir que la quantité d’ADN va être suffisante pour mener votre étude
Répéter ses manips parce que quelques choses ne fonctionne pas est très frustrant. Avoir besoin d’extraire un nouveau stock d’ADN pour terminer une étude est une perte de temps. Quantifier précisément votre ADN purifié, vous permettra d’estimer en amont le nombre d’essais réalisables et d’éviter ainsi d’avoir à refaire une étape d’extraction supplémentaire. Vous obtiendrez plus rapidement vos résultats et vous dégagerez alors plus de temps pour l’analyse.
4-Découvrir que votre échantillon est trop dilué avant de réaliser vos expériences
Parfois, extraire de l’ADN de certains types d’échantillons peut être problématique. Cela veut dire que le rendement peut être différent de ce que vous attendez. Certaines méthodes ne sont pas suffisamment sensibles pour vous donner une valeur précise de l’ADN obtenu. La méthode par absorbance peut détecter en théorie 2ng/µl dans un échantillon parfaitement pur. Certaines méthodes plus sensibles sont capables de mesurer des concentrations en ADN de l’ordre de 0,5ng/ml. Alors que certaines expériences fonctionnent avec des taux très faibles d’ADN, d’autres nécessitent des quantités plus élevées. Il est donc important de connaitre avec précision votre concentration en ADN avant de débuter votre expérimentation.
4.(5)- « Dégager plus de temps pour vos loisirs ! »
Maîtriser votre concentration en ADN peut vous éviter de devoir renouveler des extractions et expériences et ainsi vous dégager plus de temps pour vous détendre!!
5-Être sûr d’utiliser le bon type d’ADN
Dans certaines applications il est important de savoir si on utilise de l’ADN simple brin ou double brin. Même si vous utilisez un protocole d’extraction qui favorise l’un ou l’autre, le dosage par absorbance ne distinguera pas les 2 formats d’ADN. Pour cela, il existe des marqueurs fluorescents qui permettent de quantifier spécifiquement l’ADN simple brin ou du double brin. Utilisez le Quantifluor ssDNA System (en savoir plus) ou le Quantifluor dsDNA (en savoir plus). Ainsi vous serez assuré de quantifier correctement ce qui vous intéresse.
6-Être sûr que l’on parle d’ADN et non de contaminations par de l’ARN ou des protéines
L’absorbance à 260nm ne dose pas que l’ADN. De nombreux composés organiques, les protéines, les contaminants issus de l’extraction tels que Phénol et les autres acides nucléiques (ARN, ssADN, et les amorces) absorbent également à 260nm. Vous allez donc avoir tendance à surestimer votre concentration en ADN. En utilisant un marqueur fluorescent avec une courbe standard en 2 points comme le Quantifluor One dsDNA System (en savoir plus) avec le Fluorimètre Quantus (en savoir plus ) vous allez pouvoir quantifier précisément votre concentration en ADN en ayant un minimum d’interférence avec les contaminants.
Téléchargez notre [Infographie] sur les différentes méthodes de quantification ADN- ARN
Back to Top
