8 Astuces Pour Réussir vos Transfections

  Dans votre laboratoire, chacun a son protocole pour les expériences de transfection ? Pour être certain de réussir, voici 8 astuces en or.   

Qu’est-ce que la transfection ?

La transfection est un procédé qui permet d'introduire des acides nucléiques dans les cellules eucaryotes. Lors de la transfection il est absolument nécessaire de minimiser les effets indésirables tels que la cytotoxicité mais également d’optimiser l’intégration et l’expression du gène d’intérêt dans la cellule cible. 

L’efficacité des transfections peut varier d’un chercheur à l’autre

La plupart du temps les  laboratoires n’ont pas un seul et unique protocole de référence pour réussir leurs expériences de transfection. Chacun adapte son protocole en fonction du type cellulaire de départ et de la construction à introduire. Un chercheur peut avoir besoin de transfecter différents vecteurs voir même différentes constructions génétiques dans une même lignée cellulaire, ou encore de tester un vecteur sur différentes lignées cellulaires.

La transfection dépend donc de nombreux paramètres et leur réalisation peut s’avérer plus ou moins complexe. Ainsi certaines cellules comme les cellules primaires peuvent être compliquées à transfecter, certains acides nucléiques auront besoin d’être optimisés pour réussir la transfection.

8 astuces pour augmenter vos chances de succès.

Il existe malgré tout des prérequis pour améliorer l’efficacité de vos transfections, voici quelques astuces :

1. Optimiser la quantité d’ADN
   • La quantité dépend du type cellulaire et de l’ADN à transfecter et requiert une optimisation
   • Une gamme comprise entre 1 et 10 µg pour une Boîte de Pétri traitée culture cellulaire (Ø 60 mm) convient généralement (à adapter suivant la surface utilisée)
     
     
2. Optimiser le ratio ADN/agent de Transfection
   • Un ratio compris entre 1.5 :1 à 4 : 1 (Agent de transfection/ADN) fonctionne bien pour la plupart des lignées cellulaires.
     
     
3. Vérifier la qualité de votre ADN >   Certains contaminants (endotoxines, sels, éthanol) peuvent impacter négativement l’efficacité de transfection ou avoir des conséquences sur la viabilité cellulaire
   
   
4. Optimiser la durée de transfection
   • Les temps de contacts peuvent varier entre 30 min et 4 heures voir sur la nuit pour certaines lignées.
   • Vérifier l’état des cellules (morphologie, viabilité, état prolifératif …). Les cellules en phase de division son généralement plus réceptives à l’introduction d’acide nucléique extérieur que des cellules quiescentes.
   • Une réduction de la durée de transfection peut permettre de réduire l’impact sur la viabilité du procédé de transfection et de réduire la cytotoxicité
     
     
5. Choisir un agent de transfection tolérant au sérum lorsque cela est nécessaire
   • Certaines lignées cellulaires exigent la présence de sérum, il est donc nécessaire de vérifier la compatibilité de votre agent de transfection !
     
     
6. Optimiser la quantité de cellules par puits 
   • Les cellules doivent atteindre une confluence de 50-80% le jour de la transfection.
   • Il est généralement recommandé de partir de partir sur 10⁶ cellules/essais (ou 5X10⁵ pour une Boîte de Pétri traitée culture cellulaire Ø 60 mm, à adapter suivant la surface utilisée)
     
     
7. Inclure un contrôle de transfection
   • Des plasmides exprimant un gène rapporteur sont classiquement utilisés (luciférase, β-galactosidase, CAT …)
     
     
8. Contrôler l’état de vos cellules !
   
   => Assurez-vous que vos cellules sont en phase de prolifération et contrôlez également qu’il n’y ait pas de contamination (mycoplasmes, bactéries) avant votre transfection.

 

Téléchargez notre infographie 8 astuces pour réussir vos transfections.

  

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