Vous travaillez avec de l'ARN … Attention aux Ribonucléases (RNases)!
Elles sont partout et incroyablement stables et difficiles à inactiver.
Voici quelques conseils assez simples, pour les combattre et éviter la dégradation de vos échantillons d’ARN.
1) Portez des gants et manipulez dans un environnement stérile tous vos échantillons d’ARN ainsi que tous les réactifs qui seront en contact avec des ARN.
2) Utilisez de préférence des consommables en plastique stériles et jetables. Ces produits sont exempts de RNase et nécessitent aucun traitement spécifique supplémentaire.
3) Traitez la verrerie ainsi que la vaisselle en plastique non jetable avant utilisation. Pour la verrerie, la traiter une nuit à 250°C. Pour la vaisselle en plastique, rincez-la avec une solution d'EDTA 0.1N NaOH/1mM puis avec de l'eau traitée au pyrocarbonate de diéthyle (DEPC).
4) Identifiez « RNase Free » les produits chimiques et les solutions nécessaires à l'isolement et à l'analyse des ARN, et destinez les uniquement à cette application. Conservez-les séparément des réactifs utilisés pour d'autres applications. Portez des gants chaque fois que vous manipulez ces réactifs dédiés et utilisez des instruments de laboratoire stériles.
5) Méfiez-vous ! L'autoclavage seul n'est pas suffisant pour inactiver toutes les RNases. Les solutions que vous préparez doivent être traitées en ajoutant du DEPC à 0,05 %* et incubées toute une nuit. Puis un autoclavage de 30 min éliminera toutes traces du DEPC.
6) Délimitez une "zone de travail réservée à l'ARN" dans votre laboratoire avec des équipements, réactifs et du consommable de laboratoire dédiés à cette utilisation.
7) Avant et après chaque expérimentation, nettoyez votre paillasse avec une solution qui dégrade les RNAses.
8) Enfin et surtout ajoutez la RNasin® Ribonuclease Inhibitor dans vos mix réactionnels pour prévenir la dégradation de vos ARN.
Restez constamment vigilants … ne prenez pas le risque d’anéantir votre travail !!
Pour info : Les tampons à base de tris ne peuvent pas être traités avec DEPC ! Acheter un Tris garanti sans RNase et utiliser de l'eau traitée DEPC ou « nucléase free » pour préparer vos solutions.
* 0,05% DEPC (v/v) Solution
50µl DEPC par 100ml de solution
[DEPC est un cancérigène présumé.]
