Extraction ADN circulant (ccfDNA): comment préparer le plasma en évitant la contamination par l’ADN génomique?
Idéalement, le sang total doit être traité immédiatement après le prélèvement ou conservé entre 2-10 ° C jusqu'à la préparation du plasma:
1- Centrifuger le sang total récolté en tubes EDTA pendant 10 minutes à 2000 x g pour sédimenter les globules rouges et blancs.
2- Avec une pipette, retirer délicatement autant de plasma que possible sans perturber la couche leuco-plaquettaire (Buffy coat).
3- Procéder à une seconde centrifugation du plasma pendant 10 minutes à 2000 × g de manière à éliminer complètement les globules blancs, source de contamination en l’ADN génomique.
4- Avec une nouvelle pipette, retirer délicatement autant de plasma que possible (sans cellule) et le transférer dans un tube propre pour utilisation directe ou stockage.
Il est recommandé de garder le plasma entre 2-10°c pendant une semaine et à -20°c voir -65°c pour un stockage à long terme.
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