Quelle est la différence entre une RT-qPCR en 1 étape ou 2 étapes ?
La différence fondamentale entre ces 2 approches est l’étape de rétrotranscription (RT).
Pour une RT-qPCR en 1 étape, la RT et la qPCR se font successivement dans le même tube à partir de la totalité de l’ADNc synthétisé lors de la RT. Pour cette raison, la RT-PCR en 1 étape peut être plus sensible.
Pour une RT-qPCR en 2 étapes, les deux étapes se font successivement mais dans deux tubes séparés. Une partie seulement de l’ADNc synthétisé à partir des primers (Random ou Oligo(dT)15) est utilisé pour la qPCR.
Cet ADNc stock pourra servir pour plusieurs réactions de qPCR permettant la quantification de multiples cibles à partir du même échantillon ou la réalisation de réplicats techniques.
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